產(chǎn)品介紹

登革熱IgM（捕獲法）ELISA檢測(cè)試劑盒Panbio

應(yīng)用范圍

DENV Detect IgM Capture ELISA是一種用來檢測(cè)人是否感染登革熱病毒的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，它可以檢測(cè)出人血清中是否存在抗登革熱病毒源性重組抗原（DENVRA）的IgM抗 體。此診斷實(shí)驗(yàn)用于有登革熱發(fā)熱或是登革熱血熱臨床癥狀的病人檢測(cè)。陽性結(jié)果必須經(jīng)過蝕斑減少中和試驗(yàn)（PRNT）或是根據(jù)CDC疾病診斷指南確證。

用于臍帶血檢測(cè)，新生兒測(cè)試，產(chǎn)前篩查，或是普通人群篩查的實(shí)驗(yàn)特征性能還未建立。此試驗(yàn)未經(jīng)FDA明確證明可用于血液或血漿捐獻(xiàn)者的檢測(cè)。

注意：試驗(yàn)中需觀察西尼羅河或是其他病毒中的IgM是否會(huì)與登革熱試劑盒發(fā)生交叉反應(yīng)，如可能發(fā)生了交叉反應(yīng)，則視為警告狀態(tài)

實(shí)驗(yàn)原理

DENV Detect IgM ELISA試劑盒是由一種酶聯(lián)擴(kuò)大的兩步法免疫檢測(cè)系統(tǒng)。在此實(shí)驗(yàn)中，將登革熱陰性質(zhì)控、陽性質(zhì)控和未知濃度的血清樣品用樣品稀釋液稀釋，然后加入到包被 了抗人IgM抗體的微孔中溫育，之后分別加入登革熱源性重組抗原DENVRA和正常細(xì)胞抗原（NCA）進(jìn)行溫育。溫育并洗板后，用HRP標(biāo)記的DEN特異 性抗體處理。第二次溫育并洗板后，加入TMB底物液進(jìn)行溫育。之后再加入酸性終止液，450nm處測(cè)OD值可確定底物反應(yīng)的程度。當(dāng)高于一定數(shù)值時(shí)（臨界 值），樣品的吸光度值可確定樣品中是否存在登革熱抗體。

注意：陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控以內(nèi)在質(zhì)控形式提供，其目的是為了監(jiān)測(cè)試劑盒成分的完整性。

試劑盒成分

登革熱IgM ELISA試劑盒提供了足夠做96個(gè)測(cè)試所需要的試劑。試劑盒成分如下：

登革熱檢測(cè)特定材料：

1）抗人IgM包被的包被板：帶板蓋的板架，包被有抗人IgM， 96孔，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

2）樣品稀釋液：1瓶，25ml，即用，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，0.05%的Proclin防腐劑和添加劑，用于試驗(yàn)樣品，陽性和陰性質(zhì)控的稀釋，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

3）即用型的登革熱重組性抗原（DENRA）：1瓶，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，抗生素（0.0025-0.004% G418 硫酸鹽），登革熱重組抗原和添加劑， 2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

4）即用型正常細(xì)胞抗原（NCA）：1支，3ml，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.05%的Proclin防腐劑，COS-1細(xì)胞的上清， 2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

5）登革熱陰性質(zhì)控：1支，50ul陰性血清，登革熱陰性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

6）登革熱IgM陽性質(zhì)控：1支，50ul含0.03%的proclin的陽性血清，登革熱陽性質(zhì)控可輔助監(jiān)測(cè)試劑盒的完整性。2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

7）10倍濃縮洗滌液：1瓶，120ml，含吐溫20的10倍濃縮的磷酸緩沖鹽，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

8）HRP標(biāo)記的即用型酶聯(lián)物，1瓶，6ml，HRP標(biāo)記的黃熱病毒活性單克隆抗體，含吐溫20的Tris-HCl緩沖液，＜0.01%的硫柳汞防腐劑和添加劑，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。

9）Enwash：1瓶，20ml，即用，含吐溫20的磷酸緩沖鹽， 2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定

10）            TMB底物液：1瓶，9ml液態(tài)底物液，即用，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：底物液必須始終儲(chǔ)存于避光試劑瓶中。

11）            終止液：1瓶，內(nèi)含6ml即用型的終止液，1N的硫酸，2-8℃下儲(chǔ)存，有效期內(nèi)穩(wěn)定。注意：強(qiáng)酸，請(qǐng)戴保護(hù)手套、口罩和安全鏡，按照安全條例處理所有的材料。

實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供

1）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

2）生物學(xué)或高純度水

3）真空泵

4）洗板機(jī)

5）37℃無CO2的孵箱

6）1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。

7）聚丙烯試管

8）Parafilm封口膜

9）計(jì)時(shí)器

10）            旋渦混合器

樣品的采集與準(zhǔn)備

1）此實(shí)驗(yàn)必須用血清來做。全血和血漿樣本不能直接檢測(cè)。

2）不要將不同批次的試劑混亂

3）不要加熱熱滅活的試驗(yàn)血清

4）實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫，溫度的改變會(huì)對(duì)試驗(yàn)有影響

5）避免反復(fù)凍融樣品血清

6）直接用干凈的槍頭從試劑瓶中移去試劑，不能轉(zhuǎn)移，避免污染

7）不用的板條應(yīng)立即放回至密封袋中保存

8）不要使用任何過期的試劑

9）避免試劑暴露受熱或陽光直射

10）            有些試劑可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前一定要混勻

11）            洗滌過程不完整會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響

12）            為了減少由于孵育時(shí)間的差異而引起的漂移，建議底物液和終止液加入的時(shí)間和速度要*

13）            避免試劑中有微生物污染，尤其是酶聯(lián)物

14）            每一次吸取試劑，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品時(shí)都應(yīng)用干凈的槍頭

實(shí)驗(yàn)步驟

將所有的試劑成分和樣品都平衡至室溫。實(shí)驗(yàn)前反復(fù)倒置以混合試劑和樣品。

試劑準(zhǔn)備：

1）1X洗滌液的配制：用生物學(xué)或高純度水將10倍濃縮型的洗滌液稀釋成1X的洗滌液。為了制備即用型的洗滌緩沖 液，我們可以將120ml 10倍濃縮的洗滌液加入到1080ml蒸餾水或去離子水中，沖洗掉所有晶體，旋渦混合溶液以至所有晶體都溶解掉。制備好的洗滌液可在室溫下穩(wěn)定儲(chǔ)存6個(gè) 月。使用前請(qǐng)檢查洗滌液是否被污染。

2）包被板的準(zhǔn)備：將實(shí)驗(yàn)所需數(shù)目的板條置于板架上。將剩余的板條立即裝入包裝袋中，并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下，有效期內(nèi)穩(wěn)定。
操作步驟：

1）陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控都必須做雙份檢測(cè),DENRA和NCA都要檢測(cè)，未知血清樣品可做一份或雙份，DENRA和NCA都要檢測(cè)，按照說明書上的操作流程圖進(jìn)行操作。

2）將實(shí)驗(yàn)中使用的板條標(biāo)記好。

3）用試劑盒提供的樣品稀釋液將血清和質(zhì)控品稀釋100倍。用小聚丙烯試管進(jìn)行稀釋，稀釋時(shí)至少需要4ul血清、陽性質(zhì)控和陰性質(zhì)控。如：4ul血清加396ul稀釋液。

4）用單道或多道移液器將稀釋好的血清、陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控各50ul加入到相應(yīng)的微孔中。注意，所有的樣品都必須用DENRA和NCA檢測(cè)。

5）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。

注意：這樣是為了保證溫度的分布在每個(gè)孔的底部和邊緣同等地散播。一旦頂部密封阻礙了蒸發(fā)，任何多余的封板膠必需被剪掉。

6）37℃下孵育1小時(shí)。注意：不要將微孔板疊放，必須單獨(dú)地分層平輔。這對(duì)于溫度的平等分布非常重要。不要使用CO2或任何氣體，不要讓板條接觸任何濕潤(rùn)的物質(zhì)，如濕紙巾等。

7）溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。

8）在A-D列中加入50ul DENRA，在E-H列中加入50ul NCA。

9）用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）

10）            37℃下孵育1小時(shí)。（同步驟6）

11）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。

12）            用多道移液器在每一微孔中加入50ul HRP標(biāo)記的酶聯(lián)物。

13）            用封板膠僅在開放的微孔表面封板，所有板條的底部是沒有覆蓋的。（同步驟5）

14）            37℃下孵育1小時(shí)。（同步驟6）

15）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。

16）            用多道移液器在每一微孔中加入150ul Enwash溶液。

17）            室溫下溫育（無需蓋板）5min。

18）            溫育后，用洗板機(jī)洗板6次，每次每孔300ul。

19）            用多道移液器在每一微孔中加入75ul TMB底物液。

20）            室溫避光溫育10min。

21）            溫育后，用多道移液器在每一微孔中加入50ul終止液，室溫溫育1min。

22）            溫育后，450nm處測(cè)    OD值。

登革熱IgM ELISA實(shí)驗(yàn)操作流程圖：

質(zhì)量控制

每一試劑中均含有陰性和陽性質(zhì)控血清，這些質(zhì)控可接受的免疫指數(shù)（ISR）值會(huì)在以下的詳細(xì)表格中說明，陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控是用于監(jiān)測(cè)試劑的實(shí) 質(zhì)性錯(cuò)誤，陽性質(zhì)控并不保證試劑臨界值的精確性。如果任一質(zhì)控的ISR值不符合說明書，則本次實(shí)驗(yàn)是無效的必須重做，如果實(shí)驗(yàn)是無效的，病人的結(jié)果不能公 布。質(zhì)量控制的執(zhí)行必須與地方的，國(guó)家的或聯(lián)盟規(guī)則要求和你實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制程序標(biāo)準(zhǔn)相*，建議使用者參照NCCLS C24A和42CFR493、1256作為質(zhì)量控制實(shí)踐的指引。以下的結(jié)果僅作為例子。

陰性質(zhì)控的計(jì)算：計(jì)算DENRA和NCA的登革熱病毒陰性質(zhì)控值。

例如：登革熱陰性質(zhì)控

                     DENRA          NCA

                       0.108          0.066 

          No 2             0.082          0.061 

          總和             0.190          0.127

平均值（DENRA）= 0.190÷2 = 0.095

       （NCA） = 0.127 ÷ 2 = 0.064 

計(jì)算DENRA/NCA的比例： 0.095÷0.064 = 1.48

登革熱陰性質(zhì)控的計(jì)算DENRA/NCA比例高于1.65，則實(shí)驗(yàn)必須重做。

陽性質(zhì)控的計(jì)算：計(jì)算NCA和DENRA的登革熱IgM陽性質(zhì)控。

例如：登革熱陽性質(zhì)控

DENVRA              NCA

                     0.635             0.105

         No 2            0.655             0.115

         總和            1.290             0.220

平均值（DENVRA）= 1.290÷2 = 0.645

       （NCA） = 0.220 ÷ 2 = 0.110 

計(jì)算DENVRA/NCA的比例： 0.645÷0.110 = 5.86

登革熱陰性質(zhì)控的計(jì)算DENVRA/NCA比例低于5.0，則實(shí)驗(yàn)必須重做。

為了能出具實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須滿足下列表格的要求。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能*下列要求，則說明試劑退化了或者實(shí)驗(yàn)步驟出現(xiàn)了問題，實(shí)驗(yàn)必須重做。

表1：

結(jié)果計(jì)算:

ISR值的計(jì)算：如果樣品是做雙份檢測(cè)，計(jì)算DENRA兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均OD值，計(jì)算NCA兩個(gè)陰性質(zhì)控的平均OD值，并計(jì)算DENVRA/NCA的比率(ISR)。如果未知樣品只做了一份，直接用DENVRA OD值除以NCA OD值

選擇臨界值和確定可疑范圍：109個(gè)真陽性和97個(gè)真陰性樣品用于優(yōu)化ISR臨界值，建立可疑范圍?？梢煞秶蓛蓚€(gè)臨界值決定，ISR≥2.84的為陽性，相應(yīng)的特異性為99%，靈敏度為91%；ISR≤1.65的為陰性，相應(yīng)的特異性為96%，靈敏度為94%，可疑范圍為1.65-2.84.

結(jié)果說明

表2：:

期望值

疫區(qū)人群

此登革熱IgM檢測(cè)試劑盒在2009年被南美的一間診所用于檢測(cè)有登革熱癥狀人群的血清樣本.被篩查的66位個(gè)體在起初都有發(fā)燒的癥狀.樣本中包含有初次和二次的感染.樣本的反應(yīng)關(guān)系見下面表3和表4.

表3：疫區(qū)人群患者的期望值

a:所有反應(yīng)的樣品都經(jīng)PRNT驗(yàn)證

非疫區(qū)人群

2004年3月期間,從佛羅里達(dá)州, 德克薩斯州, 賓夕法尼亞州收集無登革熱癥狀的200份血清樣本.樣本覆蓋男女的不同年齡階段.被篩選的血清反應(yīng)性見下表4

表4：非疫區(qū)無登革熱癥狀人體的期望值

               a:此樣品經(jīng)PRNT驗(yàn)證為登革熱陽性

性能特征

世界衛(wèi)生組織調(diào)研表

用于熱帶病和兒童登革熱研究和培訓(xùn)的詳細(xì)參考表由兒童緊急基金會(huì)/開發(fā)中心/世界銀行/世界衛(wèi)生組織共同提供的.由提供血清樣本的七間實(shí)驗(yàn)室共同出編制.

其中一張用登革熱IgM ELISA檢測(cè)試劑盒篩查實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表是在波多黎各的病控中心完成,具體見表5

表5：WHO參考樣品的反應(yīng)性

陽性率和陰性率制成表格形式，差的情況就是，可疑樣品對(duì)于陽性率來說是假陰性，而可疑樣品對(duì)于陰性率來說卻是假陽性。

陽性比率：(100/109) 91.7% (95% CI: 84.9-95.8%)

陰性比率：(90/97) 92.8% (95% CI: 85.6-96.7%)

臨床研究

研究中心1：

此研究采用了一系列具有登革熱癥狀的血清樣本.在規(guī)定的時(shí)期內(nèi)收集預(yù)定所需的樣本數(shù).197位個(gè)體的血清均取自東南亞的一些實(shí)驗(yàn)室,各取雙份 (1至2周內(nèi)收集,共394份)經(jīng)實(shí)驗(yàn)室證明感染有登革熱的血清樣本.所有的個(gè)體在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)不同的檢測(cè)方法(包括,PCR, IgG滴定等)確定為陽性結(jié)果.

以上所獲的樣本均用PANBIO公司提供的登革熱IgM ELISA試劑盒檢測(cè).以發(fā)燒持續(xù)天數(shù)作為函數(shù)的陰性和陽性結(jié)果具體如下表.

表6：研究中心1的結(jié)果

注意：陽性率和陰性率制成表格形式，差的情況就是，可疑樣品對(duì)于陽性率來說是假陰性，而可疑樣品對(duì)于陰性率來說卻是假陽性。

研究中心2：

究所采集的具有登革熱癥狀的212個(gè)體樣本均來自美國(guó)西部.2008-2009年度在規(guī)定的時(shí)期收集到預(yù)定所需的樣本.其中大部分的樣品來自加 勒比海和美國(guó)德克薩斯州和佛羅里達(dá)州.另外小部分的樣品來自非洲和亞洲.檢測(cè)的212份樣本中,116份為陰性,67份為陽性,29份為可疑樣本.可疑樣 本按說明書的規(guī)定重測(cè)后,有13份為陰性,5份為陽性,11份仍為可疑樣本.

由于樣本量和樣本的獲取等各種原因,只有PRNT檢測(cè)了其中11份可疑樣本中的5份(其中3份為陽性),72份陽性樣本中的70份(62份為陽 性). 另共有130份樣本不是用PRNT篩查,而是在疾控中心用CDC Dengue MAC ELISA檢測(cè),共有9份不確定,4份可疑.再用PRNT重測(cè),其中9份不確定樣本中有3份是陽性,4份可疑樣本中有2份為陽性. PRNT and CDC MAC ELISA具體統(tǒng)計(jì)見表7b.其中CDC MAC ELISA的13份可疑或不確定樣本由PRNT分類.

表7a：反應(yīng)樣品經(jīng)PRNT驗(yàn)證的結(jié)果

表7b：反應(yīng)樣品經(jīng)CDC MAC Elisaa驗(yàn)證

a: CDC MAC中的13個(gè)樣品仍為不確定或是可疑，終經(jīng)PRNT驗(yàn)證劃分

陽性和陰性率的計(jì)算由PRNT和CDC MAC數(shù)據(jù)共同決定

陽性率：(63/75) 84.0% (95% CI: 73.9-90.8%)

陰性率：(121/137) 88.3% (95% CI: 81.8-92.8%)

此比率是PRNT和CDC MAC數(shù)據(jù)合并的結(jié)果，CDC MAC Elisa中的可疑或不確定的樣品（n=13）終經(jīng)PRNT劃分

研究中心3：

登革熱IgM Capture ELISA試劑盒特異性的評(píng)估在美國(guó)中西部的一間公共健康實(shí)驗(yàn)室完成.此項(xiàng)研究采用了289份有登革熱癥狀樣本(2005-2008年期間收集) (其中136位個(gè)體并發(fā)患有西尼羅河病毒, 甲型肝炎,乙型肝炎,HIV, 落磯山斑點(diǎn)熱(RMSF), 軍團(tuán)病或萊姆病).所有的檢測(cè)和診斷都在公共健康實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成.所有的樣本均采自沒有爆發(fā)過登革熱疫性的美國(guó)中西部.基于這種歷史條件,因此所有個(gè)體均可 認(rèn)為無登革熱病毒攜帶者.

經(jīng)過*次的檢測(cè)和可疑樣本的重測(cè),終得到215份樣本為陰性,22份仍為可疑.52份樣本為陽性.74份(包括陽性的和可疑)樣本均用PRNT重測(cè)過,發(fā)現(xiàn)終的交叉反應(yīng)的原因歸咎于西尼羅河病毒.

表8：美國(guó)無疫情的樣品檢測(cè)結(jié)果

a:所有登革熱PRNT檢測(cè)到的陽性樣品的滴定量較低，被認(rèn)定為是西尼羅河陽性血清，表明可能與登革熱PRNT發(fā)生了交叉反應(yīng)

b:注意：所有的假陽性和大量的可疑樣品僅僅是因?yàn)榕c西尼羅河陽性樣品間的交叉反應(yīng)

樣本可能會(huì)依據(jù)個(gè)人病情而進(jìn)一步細(xì)分，例如，西尼羅河病毒的陽性個(gè)體可能與登革熱試劑盒發(fā)生了交叉反應(yīng)，結(jié)果見下表

表9：上述疑似發(fā)生了交叉反應(yīng)的樣品檢測(cè)結(jié)果

無其他疾病的陰性率：(100/101) 99.0% (95% CI: 94.1-100%)

除了西尼羅河病毒外地伴隨疾病的陰性率：(35/35) 100% (95% CI: 88.2-100%)

西尼羅河病毒的陰性率：(80/136) 58.8% ((95% CI: 50.4-66.7%)

35位個(gè)體未患有登革熱樣本(其中5份患有落磯山斑點(diǎn)熱(RMSF),2份患有軍團(tuán)病,2份患有萊姆病,8份患有HIV,2份甲型肝炎,5份患有乙型肝炎,11份患有丙型肝炎)經(jīng)PANBIO登革熱IgM

Capture ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)沒有一份表現(xiàn)為陽性或可疑.

在136位個(gè)體未患有登革熱樣本但攜帶有西尼羅河病毒的樣本中,80份為陰性,16份為可疑,40份為陽性.

研究中心4

登革熱IgM Capture ELISA試劑盒特異性的評(píng)估是在美國(guó)南部的一間健康中心進(jìn)行的.此次評(píng)估用了199份(從2004-2008期間收集)認(rèn)為無登革熱癥狀的樣本.大部分 的病患有頭痛或發(fā)燒的癥狀,其他都表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)方面的癥狀.初次檢測(cè),183份樣本為陰性,10份為可疑,10可疑樣本經(jīng)重測(cè)后,其中有6份被檢測(cè)為陽 性. 再重測(cè)一次,10份可疑樣本均為陰性.

這199份樣本進(jìn)一步用疾控中心用CDC Dengue IgM (MAC) ELISA檢測(cè)試劑盒重測(cè),分類為陽性,陰性,可疑,不可解釋.終發(fā)現(xiàn)有16份樣本為無法解釋樣本. 這些可疑樣本用PRNT測(cè)則為陰性.如下表如示,用CDC Dengue IgM ELISA試劑盒檢測(cè),總有1份樣本可疑,1份陽性.

表10：無疫情區(qū)的登革熱樣品檢測(cè)結(jié)果

陰性率：(191/197) 97.0% (95% CI: 93.4-98.7%)

研究中心5：

此次探究性研究采用55位具有癥狀表現(xiàn)的個(gè)體樣本(平均年齡在35.1年,樣本收集于2009年)均來自南美登革熱疫區(qū).樣本的2次訪問收集是 在4-14天(平均9天)采集,樣本均用登革熱IgM Capture ELISA 檢測(cè)試劑盒檢測(cè).可疑樣本用同樣的試劑盒重測(cè).同時(shí)用PRNT方法驗(yàn)證第1次和第2次訪問的人群.在第1次和第2次之間訪問樣本的PRNT 4倍增長(zhǎng)值表明有39位個(gè)體當(dāng)前具有登革熱癥狀.

表11：*次訪問采集的無疫情區(qū)的樣品檢測(cè)結(jié)果a

a:陽性率：(13/39) 33.3% (95% CI: 20.6-49.1%)

 陰性率：(15/16) 93.8% (95% CI: 69.7-100%)

b:PRNT陽性且*次和第二次收集的樣品之間增加值大于4倍

c:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值小于4倍

第二次訪問個(gè)體(4-14天)的血清樣本的結(jié)果如下表所示,檢測(cè)的靈敏度隨第二次訪問的時(shí)間間隔而增加.

表12：第二次訪問采集的無疫情區(qū)的樣品檢測(cè)結(jié)果

a:陽性率：(31/39) 79.5% (95% CI: 64.2-89.5%) 

陰性率：(15/16) 93.8% (95% CI: 69.7-100%)

b:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值大于4倍

c:PRNT陽性且*次和第二次之間增加值小于4倍

如“結(jié)果解釋”部分提到的，可疑樣品應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如果還是可疑樣品則需送去認(rèn)證測(cè)試

回收率研究

五天內(nèi)在不同的三個(gè)地點(diǎn),兩個(gè)不同的操作者完成對(duì)登革熱 IgM Capture ELISA檢測(cè)試劑盒可重現(xiàn)性研究實(shí)驗(yàn)的評(píng)估.樣本(包括質(zhì)控)均同時(shí)采用三份檢測(cè).實(shí)驗(yàn)分別在佛羅里達(dá)州一間公共健康實(shí)驗(yàn)室, PANBIO,在一家實(shí)驗(yàn)室.此次研究實(shí)驗(yàn)采用4份血清樣本(均按照相關(guān)規(guī)定稀釋).包括一份陰性樣本,一份剛低于可疑范圍的樣本,一份可疑樣 本,一份陽性樣本.血清樣本的稀釋均符合臨床相關(guān)要求檢測(cè)的濃度范圍.具體結(jié)果見下表.

表13：PANBIO公司登革熱試劑盒的再現(xiàn)性

所有值都用DENRA/NCA比值計(jì)算

Sx=標(biāo)準(zhǔn)劃分，如wr是板間試驗(yàn)，DD不同天地試驗(yàn)，OO不同操作者的試驗(yàn)，SS不同地點(diǎn)的試驗(yàn)

CV=變異系數(shù)

交叉反應(yīng)研究

用登革熱 IgM Capture ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)帶有幾種疾病(見下表)的血清樣本.樣本均采用雙份檢測(cè).檢測(cè)得到陽性和可疑性的樣本采用一式三份重測(cè).用血小板減少中和反應(yīng)檢 測(cè)陽性樣本是為了評(píng)估登革熱病毒的可暴露性.明顯的交叉反應(yīng)只在西尼羅河病毒中觀察到。

表14：交叉反應(yīng)

a:篩查其他含有特異性IgM抗體的樣品，與瘧疾IgM抗體的交叉反應(yīng)不能用PANBIO的登革熱檢測(cè)試劑盒評(píng)估

b:PRNT試驗(yàn)中，鉤端螺旋體樣品與登革熱酶免試驗(yàn)發(fā)生反應(yīng)，呈陽性（表格中不包括此結(jié)果，因?yàn)樗皇钦骊栃詷悠罚?/span>

除掉三份血清樣品（一份西尼羅河陽性，一份乙腦陽性和一份鉤端螺旋體陽性）的其他128份樣品經(jīng)PRNT驗(yàn)證后為陽性，24份篩查出的陽性或可疑樣品經(jīng)登革熱ELISA重測(cè)后，有12份西尼羅河陽性樣品，與西尼羅河的交叉反應(yīng)率為50%。

干擾研究：

四種干擾物質(zhì)對(duì)登革熱酶免試驗(yàn)的影響。一份登革熱陰性和四份登革熱陽性樣品根據(jù)弱陽性到強(qiáng)陽性依次排列。四種干擾物質(zhì)為膽紅素，甘油三酯，血紅 蛋白，膽固醇。膽紅素不會(huì)對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生影響，高濃度的甘油三酯對(duì)弱陽性血清有輕微影響，增大ISR值，血紅蛋白的高濃度和低濃度都會(huì)降低ISR值，膽固醇的 重復(fù)研究可得出多個(gè)結(jié)果，結(jié)果顯示膽固醇的兩個(gè)濃度都會(huì)影響DENRA的OD值，下表是相對(duì)于參考樣品，加入干擾物質(zhì)后ISR值的改變率

表15：加入干擾底物后ISR值的改變率

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